プラスミドはchromosomeから独立して複製する染色体外遺伝要素であり、細菌の環境適応において重要な役割を果たしている。プラスミドは、潜在的な移動性または接合能力により、抗菌薬耐性遺伝子や病原性因子の重要な遺伝的乗り物であり、臨床的にも大きな意味を持っている。そのため、これらは世界中の研究者の間で大規模なゲノム研究の対象となっている。次世代シークエンシングの急速に進歩の結果、シーケンシングされた細菌ゲノムの量は絶えず増加しており、その結果、(i)ドラフトアセンブリからプラスミド配列を抽出し、(ii)それらの起源と分布を導き出し、(iii)それらの遺伝的レパートリーをさらに調査するための専門的なツールの必要性が高まっている。近年、この問題に取り組むためのバイオインフォマティクス手法やツールがいくつか登場しているが、プラスミド配列の同定において、高感度と特異性を両立させることは、分類群に依存しない方法ではほとんど行われていないのが現状である。また、多くのソフトウェアツールは、大規模なハイスループット解析には適していなかったり、技術的な設計やソフトウェアの実装上、既存のソフトウェアパイプラインに組み込むことができないものが多い。本研究では、プラスミドのコンティグとchromosomeのコンティグを区別する新しいアプローチとして、タンパク質をコードする遺伝子のレプリコン分布の違いを大規模に調査した。その結果、新たな指標であるreplicon distribution score（RDS）を定義し、統計的な識別の閾値を計算したところ、96.6%の精度を達成した。最終的には、このRDS指標と、いくつかのプラスミド固有の高レベルコンティグの特徴を利用したヒューリスティックを組み合わせることで、さらに性能を向上させた。著者らは、このワークフローを、ショートリードドラフトアセンブリからのプラスミドコンティグのリクルートと特性評価のために、Platonと呼ばれる新しいハイスループットな分類群非依存型バイオインフォマティクスソフトウェアツールに実装した。PlasFlow と比較して、Platon は、幅広い細菌種でテストした結果、より高い精度 (97.5%) とよりバランスのとれた予測 (F1=82.6%) を達成し、また、大腸菌分離株のシーケンシングを目的としたツールである PlasmidFinder と PlaScope と比較して、より良いか同等の性能を達成した。Platonは次のサイトから入手可能である：platon.computational.bio
プラトンは3つの解析ステップを実施する。
１、マーカータンパク質配列(MPS)と関連するレプリコン分布スコア(RDS)からなるカスタムで事前に計算されたデータベースに対して、コード配列を予測・検索する。これらのスコアは、NCBI RefSeqの完全なレプリコン上で事前に計算されたプラスミドとchromosome間のタンパク質配列分布の経験的に測定された頻度のバイアスを表している。Platonは、各コンティグの平均RDSを計算し、RDSが95％の感度で決定された感度カットオフを下回る場合はchromosomeとして、RDSが99.9％の特異度で決定された特異度カットオフを上回る場合はプラスミドとして分類する。これらのしきい値の正確な値は、RefSeqの完全なchromosome配列とプラスミド配列から作成された人工的なレプリコン断片のモンテカルロシミュレーションに基づいて計算されている。
２、この感度フィルタを通過したコンティグは、包括的に特徴付けられる。これにより、Platonはコンティグ配列の環状化を試み、rRNA、複製、mobilizationと接合の遺伝子、oriT配列、 incompatibility group DNA probesを検索し、最後にNCBIプラスミドデータベースに対するBLAST+検索を行う。
３、最後に、全体的な感度を高めるために、Platonは収集した情報に基づいて、残りのすべてのコンティグをいくつかのヒューリスティックスによって分類する。
*MPSとRDSの定義と計算方法についてはMethodのセクションを読んでください。
HP
http://platon.computational.bio
New release v1.3.0 of our #plasmid detection tool #Platon for short read draft assemblies out. Now adjustable towards either sensitivity, accuracy or specificity via --mode parameter. Available via #bioconda https://t.co/IPI9bvu0IV
— Oliver Schwengers (@oschwengers1) 2020年5月6日
インストール
anaconda3.7でcondaの仮想環境を作ってテストした（OSはubuntu18.04LTS）。
#bioconda(link)
conda create -n platon -y
conda activate platon
conda install -c conda-forge -c bioconda -c defaults platon -y
> platon -h
$ platon -h
usage: platon [-h] [--db DB] [--mode {sensitivity,accuracy,specificity}] [--characterize] [--output OUTPUT] [--threads THREADS] [--verbose] [--version] <genome>
Identification and characterization of bacterial plasmid contigs from short-read draft assemblies.
positional arguments:
<genome> draft genome in fasta format
optional arguments:
-h, --help show this help message and exit
--db DB, -d DB database path (default = <platon_path>/db)
--mode {sensitivity,accuracy,specificity}, -m {sensitivity,accuracy,specificity}
applied filter mode: sensitivity: RDS only (>= 95% sensitivity); specificity: RDS only (>=99.9% specificity); accuracy: RDS &
characterization heuristics (highest accuracy)
--characterize, -c deactivate filters; characterize all contigs
--output OUTPUT, -o OUTPUT
output directory (default = current working directory)
--threads THREADS, -t THREADS
number of threads to use (default = number of available CPUs)
--verbose, -v print verbose information
--version, -V show program's version number and exit
Citation:
Schwengers O., Barth P., Falgenhauer L., Hain T., Chakraborty T., Goesmann A. (2020)
Platon: identification and characterization of bacterial plasmid contigs in short-read draft assemblies exploiting protein-sequence-based replicon distribution scores.
bioRxiv 2020.04.21.053082; doi: https://doi.org/10.1101/2020.04.21.053082
https://github.com/oschwengers/platon
データベースの準備
wget https://zenodo.org/record/3751774/files/db.tar.gz
tar -xzf db.tar.gz
rm db.tar.gz
実行方法
データベースとcontig配列を指定する。
platon --db ./db contig.fasta
引用
Platon: identification and characterization of bacterial plasmid contigs in short-read draft assemblies exploiting protein-sequence-based replicon distribution scores
Oliver Schwengers, Patrick Barth, Linda Falgenhauer, Torsten Hain, Trinad Chakraborty, Alexander Goesmann
BioRxiv, Posted April 23, 2020
関連
